Diabetologia：激活但功能受损的潜意识Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出有现呼吸道自身抗基底到出有现1DF白血病诊断呕吐的令人满意率在学龄前时期就有比较好的描绘出有，多个呼吸道自身抗基底感染性的学龄前当中曾70%在血清转换后10年内中风白血病，而随访15年的学龄前这一百分比减低到84%。相比较之下，九成诊断1DF白血病一半以上的DF1DF白血病的患病功能还无法给与充分的研究者。

更加为多的人开始用到应于的系统来定义1DF白血病的令人满意：个基底在出有现多种呼吸道自身抗基底时踏入第1阶段，出有现血糖异常时踏入第2阶段，出有现呕吐时踏入第3阶段。一些多发呼吸道自身抗基底感染性的个基底，在1期和2期，令人满意较比较慢，并发展为患病的1DF白血病。我们之前描绘出有了一两组在首次测定到多种呼吸道自身抗基底取样后大概10年无白血病的近乎比较慢令人满意者，这两组病变次数少，但相似性非常明确。随后，我们找到呼吸道自身蛋白质免疫CD8+T巨噬细胞反不应在令人满意缓比较慢的病变当中前提不发挥作用，但在近期患病和近十年发挥作用的白血病病变当中很容易测定到。这可能说明，与令人满意病变相比较，这些病变致病反不应的调节增强。

早期研究者说明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数目长时间，但白血病病变发挥作用一些功能缺陷，其当中除此以外对IL-2的反不应能力降低。此外，白血病病变当中的现像CD4+T巨噬细胞可能对调节更加具抵抗性，表现为现像T巨噬细胞的依赖性消散，自然转化成的Treg和基底外转化成的可借Treg，以及蛋白质经历的CD4+T巨噬细胞当中IL-2反不应消散。本研究者的目的是描绘出有了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在群集近乎缓比较慢令人满意者当中的相似性，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX研究者是一项以老年人的系统化的两端研究者，在21岁以下确诊的病变亲属当中检查1DF白血病的小心因素。我们之前描绘出有了近十年缓比较慢令人满意者的相似性，他们保持多重呼吸道自身抗基底感染性高达10年，但无法出有现白血病的诊断呕吐，比较慢性或非进行时性致病。随后，10名继续保持无白血病并不想提供者大量血清取样的缓比较慢令人满意者纳入T和B巨噬细胞功能统计分析。在在此之前的研究者当中，8名比较慢令人满意者(SP两组)，当中位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的呼吸道自身抗基底感染性。所有的自发性都所处1DF白血病令人满意的1期，尽管一些人随后夺去了呼吸道自身抗基底对某些蛋白质的感染性反不应，然而，一名病变已经所处2期大概6年，但无法出有现诊断呕吐，一名病变被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析当中对该NADPH进行时了单独统计分析。裂解外周血单个核子巨噬细胞(PBMCs)，运用于多参数流式巨噬细胞法术和T巨噬细胞依赖性试验统计分析NADPH当中Treg的Hz、表DF和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)进行时无全权负责聚类统计分析，统计分析Treg表DF。

结果：与心理健康NADPH相比较，来自比较慢令人满意基底的梦境CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类推断，触发的梦境CD4+ TregHz减低，与糖皮质激素可借的TNFR相关酶(GITR)解读减低有关。一名HbA1c增高的病变与令人满意缓比较慢者和意味着的比对两组相比较，Treg谱有所各不相同。功能统计分析说明，与心理健康NADPH相比较，来自缓比较慢令人满意基底的Treg介导的CD4+现像T巨噬细胞依赖性明显受损。表现为对现像CD4+T巨噬细胞CD25和CD134解读的依赖性减低。

绘出有1 深入的表DF统计分析推断，CD4+Treg亚DF在比较慢令人满意队列当中减低。由FlowSOM生成的Treg四楼，群聚在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物解读鉴定出有10个元簇:梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用到9个各不相同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个端口推选一个炮兵部队(100个炮兵部队)，较大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在端口两组远处上色。每个端口当中的面包绘出有回不应单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热绘出有，以推断整基底标明解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成绘出有，以及FlowSOM识别的系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说同位素为每个metacluster装入两条路线绘出有(同位素> 0.05%)确认为HD和SP两组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T巨噬细胞(l)。橘色红色推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核子查。此键适用于绘出有形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出有2 用到CITRUS的估测证实，TregHz的减低是令人满意缓比较慢的标志。分级依赖型(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP自发性和意味着的HD自发性在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)免疫CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的近现代绘出有。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读进行时裂解，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)两组以及NADPHSP 606(橘色)当中CD25+ cd127的Hz简介绘出有。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型偏序的装入两条路线绘出有;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读风速着色，左下角突出有的簇被识别的系统为SP和HD队列二者之间的各不相同。(j)装入两条路线绘出有推断了在SP(虎纹)和HD(灰点)两组当中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对来说同位素(百分比)。(k)直方绘出有推断每个簇的表DF(粉色)和Treg标明相对来说解读与取材解读(黄色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。取材与所有其他簇当中标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核子查

绘出有3 与心理健康献血者相比较，令人满意缓比较慢者梦境treg的GITR减低。每个梦境CD4+T巨噬细胞元簇(梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个解读标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热绘出有(sp606不除此以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇当中所有HD(蓝灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR解读串联，推断直方绘出有(c)和简介绘出有(d)。Wilcoxon配对符号秩和核子查，p< 0.07(橘色)所有NADPH除此以外，p< 0.05(黄色)NADPHSP 606和意味着的HD不除此以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR解读，从分级依赖型，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橘色)串联，推断直方绘出有(e)和简介绘出有(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核子查

绘出有4 来自缓比较慢令人满意的CD4+ treg巨噬细胞控制现像CD4+T巨噬细胞的能力降低。SP两组用黄色的两条路线和红色回不应，HD两组用黑色的两条路线和红色回不应，橘色的两条路线/红色回不应NADPHsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标明为CFSE, Treg按注意到的百分比氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，养成3同月进行时流式巨噬细胞法术测定。(a-d)与CD4+这样的话者相对来说不应的treg养成(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者养成。(a,b,f) CFSE可借(a,e)和CFSE依赖性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性%-。用到感染性比对(触发的响不应巨噬细胞不含treg)计算依赖性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出有5 现像CD4+T巨噬细胞对缓比较慢令人满意的T巨噬细胞再生的依赖性更加寻常。SP两组用黄色的两条路线和红色回不应，HD两组用黑色的两条路线和红色回不应，橘色的两条路线/红色回不应NADPHsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标明，treg按注意到的百分比氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，养成3同月进行时流式巨噬细胞法术(CD25反染)和巨噬细胞因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同养成。(a,b) CFSE可借(a)和CFSE依赖性次之(b)。(c,d) CD25依赖性次之(c)和CD134依赖性次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究者生院当中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推论的结论是，来自缓比较慢令人满意子的再生梦境CD4+Treg在GITR解读当中给与了适配和丰富，强调了再进一步研究者Treg在1DF白血病风险个基底当中的异质性的必要性。

原文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28